1.Utilisation deandrotec andrographolide 
Androtec unLe ndrographolide est un inhibiteur de NF-κB, qui inhibe l'activation de NF-κB par modification covalente d'un résidu cystéine sur p50 dans les cellules endothéliales sans affecter la dégradation de IκB ou la translocation nucléaire de p50/p65.
2.Activité biologique de l'andrographolide
In vitro: L'andrographolide (AP) supprime de manière dépendante de la concentration l'activateur du récepteur du ligand du facteur nucléaire kappa B (RANKL) médié par la différenciation des ostéoclastes et la résorption osseuse in vitro et réduit l'expression de marqueurs spécifiques aux ostéoclastes. L'andrographolide atténue l'inflammation en inhibant l'activation de NF-κB induite par le TNF par modification covalente de la Cys62 réduite de p50, sans affecter la dégradation de l'IκB ou la translocation nucléaire de p50/p65. L'andrographolide inhibe également la voie de signalisation ERK/MAPK sans affecter la signalisation p38 ou JNK. L'andrographolide inhibe la différenciation des ostéoclastes des cellules RAW 264.7 d'une manière dépendante de la concentration. L'andrographolide supprime la formation d'ostéoclastes de manière dépendante de la concentration sans aucun effet cytotoxique évident, à la fois dans les cellules BMM et RAW 264.7. Le traitement à l'andrographolide réduit considérablement la zone de résorption osseuse. Seulement environ 30 % de la résorption osseuse observée dans le groupe témoin est obtenue après un traitement avec 2,5 μM d'andrographolide. La résorption osseuse ostéoclastique est presque complètement inhibée après un traitement avec 10 μM d'andrographolide.
In Vivo : Le traitement par Andrographolide (5 ou 30 mg/kg) réduit l'ampleur de la perte osseuse induite par le LPS. De plus, l'andrographolide augmente légèrement la DMO et l'épaisseur du cortex par rapport au traitement LPS. L'examen histologique confirme les effets protecteurs de l'andrographolide sur la perte osseuse induite par le LPS. L'injection de LPS entraîne une érosion osseuse inflammatoire et une augmentation du nombre d'ostéoclastes TRAP-positifs.
Test de kinase : des tests d'ostéoclastogenèse in vitro sont effectués pour examiner les effets de l'andrographolide sur la différenciation des ostéoclastes. Des cellules de macrophages de moelle osseuse (BMM) sont préparées. En bref, les cellules extraites du fémur et des tibias d'une souris C57/BL6 âgée de {{0}}semaine sont incubées dans un milieu de culture cellulaire complet et 30 ng/mL de M-CSF dans un T-75 flacon cm2 pour la prolifération. Lors du changement de milieu, les cellules sont lavées afin d'épuiser les cellules stromales résiduelles. Après avoir atteint 90% de confluence, les cellules sont lavées trois fois avec du PBS et trypsinisées pendant 30 min pour récolter les BMM. Les cellules adhérant au fond de la boîte sont classées comme BMM ; ces BMM sont étalés dans des plaques 96-puits à une densité de 8 × 103 cellules par puits en trois exemplaires et incubés dans un incubateur humidifié contenant 5% de CO2 à 37 degrés pendant 24 h. Les cellules sont ensuite traitées avec différentes concentrations d'Andrographolide (0, 2,5, 5 ou 10 μM) plus M-CSF (30 ng/mL) et RANKL (50 ng/mL). Après 5 jours, les cellules sont fixées et colorées pour l'activité de la phosphatase acide tartrate-résistante (TRAP). Les cellules multinucléées TRAP positives avec plus de cinq noyaux sont comptées comme des ostéoclastes.
Analyse cellulaire : les effets de l'andrographolide sur la prolifération cellulaire sont déterminés avec un CCK{{0}}. Les BMM sont plaqués dans des plaques à puits 96- à une densité de 3 × 103 cellules par puits en triple exemplaire. Vingt-quatre heures plus tard, les cellules sont traitées avec des concentrations croissantes d'Andrographolide (0, 2,5, 5, 10 ou 20 µM) pendant 2 jours. Ensuite, 10 μL de CCK-8 sont ajoutés à chaque puits, puis les plaques sont incubées à 37 degrés pendant 2 h supplémentaires. La densité optique (DO) est ensuite mesurée avec un lecteur de microplaques à absorbance ELX800 à une longueur d'onde de 450 nm (référence 650 nm). La viabilité cellulaire est calculée.
Administration animale : Souris Des souris C57BL/6 (âgées de 8 semaines) sont divisées en quatre groupes de sept souris chacun. Les souris reçoivent une injection ip d'andrographolide (5 ou 30 mg/kg de poids corporel) ou de PBS comme témoin 1 jour avant l'injection de LPS (5 ug/g de poids corporel). Andrographolide ou PBS est injecté par voie intrapéritonéale tous les deux jours pendant 8 jours. Le LPS est injecté par voie intrapéritonéale les jours un et quatre. Toutes les souris sont tuées 8 jours après l'injection initiale de LPS, et les fémurs gauches de tous les animaux sont scannés avec un micro-CT haute résolution à une résolution de 9 μm.
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